常规细胞培养方法
贴壁细胞系的传代 改编自Freshney, R.I., 1994。动物细胞培养：基本技术手册。第3版，Wiley-Liss,纽约，美国。
概述
讨论
从培养容器中去除培养基，PBS漂洗一下，将胰蛋白酶加入细胞，孵育，加入含有血清的培养基终止胰蛋白酶的反应，分散细胞，稀释后放回培养箱。 1.吸去用过的培养基并丢弃之。
5.加入含有血清的培养基(3–10mL/75cm2瓶面积),上下吹打细胞，直到细胞分散成单细胞悬液。 6.用血球计数板或库尔特粒度仪计数并将细胞稀释到合适的接种浓度。 7.向含有培养基的新的细胞培养瓶中
血清中含有胰蛋白酶的抑制剂。因此在第2步处理的时候，去除痕量的血清非常重要。第5步中培养基中含有的血清会使残留的胰蛋白酶失活并保护细胞免受伤害。如果使用无血清培养基，则可能需要另外添加胰蛋白酶的抑制剂如大豆胰蛋白酶抑制剂。胰蛋白酶的孵育时间和分散细胞成为单细胞悬液使用的力度根据不同的细胞株也有所不同。有必要调整这些参数来适应您所培养的细胞。
2.向培养瓶中加入PBS (10 mL/75 cm2瓶面积),注意不要扰动单细胞层。轻轻前后摇动培养瓶以漂洗单细胞层。然后去除PBS。 3 .加入胰蛋白酶 ( 3 m L/ 7 5 c m 2瓶面积),然后摇动培养瓶以保证整个单细胞层都被胰蛋白酶溶液覆盖。 4.孵育至细胞开始脱壁，通常3-5分钟。需要注意不要使细胞暴露在胰蛋白酶溶液的时间过长。还要注意不要在细胞消化不充分的情况下强行使之脱壁，这样容易使细胞聚集成团。
加入适当体积的细胞悬液。 8.将培养瓶放入培养箱，拧松瓶盖1/4圈，以便气体交换。
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