实验七 淀粉酶动力学分析
生物化学实验报告
实验七 淀粉酶动力学分析（Ⅱ）
——淀粉酶解米氏常数测定与阿卡波糖竞争性抑制动力学计算（4学时）
第四部分 α-淀粉酶Km值的测定
一、实验目的
了解并掌握米氏常数的意义和测定方法。 二、实验原理
当底物浓度在较低浓度增加时，酶促反应速度随着底物浓度的增加而迅速增加。当底物增至一定浓度后，即使再增加其浓度，反应速度也不会增加很快。这是由于酶浓度限制了所形成的中间络合物浓度的缘故。
Michaelis和Menten推导得出底物浓度和酶促反应速度的关系式为：
Vmax[S]
Km [S]
此式称为米氏方程，式中： 为反应速度，即每升反应体系中每分钟形成葡萄糖的摩尔数（mol/（L·min））；Vmin））；[S]为底xam为最大反应速度（mol/（L·物浓度，此实验以反应体中淀粉中葡萄糖残基的摩尔浓度表示（mol/L），注意！应以反应体系总体积计算底物浓度，如淀粉溶液浓度为1%，反应体系中有3 mL
S 淀粉溶液和1 mL淀粉酶液，则淀粉底物浓度应为：
10——1%的淀粉溶液浓度为10 g/L 180——淀粉中的葡萄糖残基的分子量 3——反应体系中1%淀粉溶液的体积（mL） 1——反应体系中α-淀粉酶的体积（mL） 。 Km为米氏常数，单位与底物浓度相同（mol/L）
103
0.0463 mol/L 1623 1
按此方程，可用作图法求出Km，常用的方法为双倒数作图法。 取米氏方程的倒数，以
11对作图： [S]
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