微量凯氏(Mirco-Kjeldahl)定氮法

实验 微量凯氏（Mirco-Kjeldahl）定氮法

一、目的

1、学习微量凯氏定氮法的原理

2、掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含量的测定，未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。

二、原理 （消化、蒸馏、滴定、计算）

凯氏定氮法常用于测定天然有机物（如蛋白质，核酸及氨基酸等）的含氮量。

天然的含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此时程称之为“消化”。

（但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。）甘氨酸的消化过程可表示如下：

NH2CHCOOH 3HSO 2CO 3SO 4HO NH

2242223

2NH3 H2SO4 (NH4)2SO4

浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定的量和浓度的硼酸溶液中（紫红色），硼酸吸收氨后（绿色），氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低。然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止（紫红色），最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的氮量。

(NH4)2SO4 2NaOH Na2SO4 2NH4OH

NH4OH H2O NH3

NH

3

H3BO3 NH4H2BO3

滴定时用甲烯蓝和甲基红混合指示剂，其指示范围为pH5.2~5.6，将NH4H2BO3的绿色滴至原来H3BO3的紫红色即为终点。

本法适用范围0.2~1.0毫克氮。相对误差应小于2%。

NH4H2BO3 HCL NH4CL H3BO3

三、器材：

1、改良型凯氏定氮仪 2、10mL微量酸式滴定管 3、酒精灯（打火机） 4、凯氏烧瓶（略） 5、锥形瓶（50~100毫升）、容量瓶（50毫升）

四、试剂

1、0.1mg/mL 标准（NH4）2SO4 300mL 2.、30% NaOH溶液 500 mL

3、2%硼酸 800 mL 4、标准HCl （0.0100M） 500 mL 5、混合指示剂（田式指示剂）： 250 mL

取50毫升0.1%甲烯蓝无水醇溶液与200毫升0.1%甲基红无水乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶备用，这种指示剂酸性时为紫色，碱性时为绿色，变色范围窄且灵敏。

本指示剂的变色范围为pH5.2 5.4 5.6 紫红色 灰色 绿色