干细胞稳定转染的步骤
医学 分子生物学
外源基因进入细胞主要有三种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法，实际上其基本原理都是利用不同的方法在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入，但是由于前两者的效率低且伤害较大，所以现在除了对于一些特殊细胞系，一般的转染方法都利用脂质体。
利用脂质体转染和其他方法一样，最重要的就是防治其毒性，因此脂质体与治理的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
本实验学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法 — 脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白）。
【试剂与仪器】
1 、胎牛血清。
2 、双抗溶液（链霉素 100μg+ 青霉素 100 单位）。
3 、DMEM 培养基。
4 、转染试剂（ LIPOFECTAMINE 2000 ）。
5 、细胞培养基（ DMEM+10%NCS ）。
6 、PBS 。
7、无血清培养基。
8 ．胰酶（ Trypsin ）。
9 ．培养皿，移液管，量筒，恒温水浴箱，离心机， 15ml 离心管，微量移液器，荧光显微镜和 CCD 。
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