小分子干扰脂质体转染

小分子干扰脂质体转染

1. 当六孔板中细胞密度达50%时,准备转染,将无血清培养基、Opti-MEM取出复温并注意平衡好;

2. 取出细胞,将培养基换成无血清培养基,放回孵箱培养;

3. 取灭菌的EP管,按要求混好小分子干扰片段(约200pmol/孔),每管加250ul Opti-MEM,轻柔混匀;

4. 另取EP管,加入lipofectamine 2000(10ul/孔)和Opti-MEM(250ul/孔),轻柔混匀后室温静置5min;

5. 将4中的混合液加入3的EP管中,250ul/孔,混匀,室温静置20min,

6. 将lipofectamine 2000-质粒混合液滴到六孔板中,500ul/孔;

7. 将细胞放回孵箱培养,4h后换回含血清的完全培养基。

小分子干扰参数:

片段量200pmol,细胞融合度为50%时转染,48h收细胞。

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