（一）材料与试剂

1．原始菌种采集：

用特制不锈钢内衬有机硅薄膜的箱式釆样器采集小清河五柳闸片区的底泥，根据不同的应用采取不同的保存方法。

2．培养基【4】:

（1）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌、芽孢杆菌用）：

成分：牛肉膏3g，蛋白胨10g ，NaCl 5g ，琼脂15g ， 蒸馏水1000ml，

pH 7.2

制法：称取蛋白胨和NaCl，加入水中，用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一烧杯

中称量，加热融化然后加入上述烧杯中。加入所需琼脂加热融化，

定容，最后调节至所需pH。121摄氏度灭菌20分钟。

（2）脑心浸液培养基（1000ml）（北京路桥技术有限责任公司，用于链球菌、

肺炎球菌、脑膜炎球菌及其它对营养苛求菌

的培养）

成分：脑心浸液培养基37g （蛋白胨10g， 牛脑浸粉 12.5g， 葡萄糖2g，

牛心浸粉5g，氯化钠 5g， 磷酸氢二钠 2.5g） 琼脂粉20g

最后定容到1000ml, 121℃灭菌20分钟。

（3）硝化细菌培养基（培养硝化细菌）

成分：亚硝酸钠1g 磷酸氢二钾0.75g 磷酸二氢钠0.25g 碳酸钠

1g 硫酸镁0.03g 硫酸锰0.01g

加蒸馏水1000ml,121℃灭菌20分钟。

（4）反硝化细菌培养基（培养反硝化细菌）

成分：柠檬酸钠5g 磷酸氢二钾1g 七水硫酸镁0.2g 磷酸氢二

钾1g 硝酸钾2g

加去离子水1000ml，调pH7.2-7.5, 121℃灭菌20分钟。

（5）亚硝化细菌培养基（培养亚硝化细菌）

成分：硫酸铵2g 磷酸二氢钠0.25g 磷酸氢二钾0.75g 四水硫酸锰

0.01七水硫酸镁0.03g 碳酸钙5g

加蒸馏水1000ml，调pH7.2，121℃灭菌20分钟

（6）乳糖胆盐培养基

成分：蛋白胨20g 猪胆盐5g 乳糖10g

方法：将蛋白胨、猪胆盐溶于1000ml水中，调pH7.4,加入25ml溴甲酚

蓝指示剂我（0.4g/L），分装每管10ml，121℃灭菌20分钟。

(7) EMB培养基

蛋白胨 10g，K2HPO4 2g， 琼脂 17g，PH 7.1，去离子水1000ml，临时用

时加入10g乳糖，20ml伊红，10ml美兰

（8）LB培养基（液体）

Tryptone（胰蛋白胨） 10g，Yeast Extract（酵母提取物） 5g，NaCl（氯化钠） 10g

(9) LB双量培养基

成分：酵母粉10g 蛋白胨20g 氯化钠20g

用去离子水定容到1000ml，用NaOH调节pH到7.4，然后分装到锥

形瓶中，每250ml,121℃灭菌20分钟。