细胞培养常用技术
细胞培养常用基本技术
一、 常用设备
1．准备室的设备： 双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品柜（放置消毒过的物品）、包装台。
2．配液室的设备：
扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液时搅拌溶液）。
3．培养室的设备：
液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳气瓶、书台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二、无菌操作
1．无菌室的灭菌：
（1）定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
（2）CO2培养箱灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射
（3）实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟
（4）实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
2．实验人员的无菌准备：
（1）肥皂洗手。
（2）穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋
（3）用75％酒精棉球擦净双手。
三、无菌操作的演示
1．凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面
2．靠近酒精灯火焰操作。
3．器皿使用前必须过火灭菌
4．继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5．各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。
6．吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
四、器械的清洗和消毒
(一)玻璃器械洗消：
1．.新的玻璃器皿的洗消：
（1）自来水刷洗，除去灰尘。
（2）烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
（3）刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘 干。
（4）泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次，最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。
（5）烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。
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