水中细菌总数测定方法的优化研究

绍兴市水务集团技术质量中心 徐 飞 王开元 浙江工业大学生命环境学院 江迎春

依据2001年实施的《生活饮用水卫生规范》（以下简称《规范》）测定饮用水源水—水库水的细菌总数，在37℃培养24小时开始菌落计数，发现计数结果总是偏低。通过多次实验，认为从以下几方面加以改进，可以提高细菌检出率，减少不确定度来源和影响。

一、稀释时增加检样量至5mL，计数比《规范》约高出20～30%

《规范》规定，吸取1mL水样注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀，制成1：10稀释液。由于水样不够均匀和测试中随机效应影响，取样1.0mL偏少，容易受偶然误差影响，无法保证取样的代表性、真实性；其次,混匀需要吸管反复吹吸数次，1个稀释度至少2~3支吸管才能完成。参照SN 0168—92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准—出口食品菌落计数》，液体、半液体的检样量为10mL，放入90mL稀释剂中。鉴于90mL稀释剂用量太大，采取一种变通的稀释办法：(1)用150mL碘量瓶作稀释瓶，内放玻璃珠，要求无菌；(2)加入5mL水样和45mL无菌生理盐水。此法只要振摇即可，不必用吸管上吹下吸，省时省力。以2个地表水为例，不同检样量（1mL和5mL）倾注法接种，培养24小时的计数结果如下：

细菌总数（CFU/ml）（稀释度：10-2）

5→45mL稀释方法的计数结果

平行样1 平行样2

145 147

134 125

1→9mL稀释方法的计数结果

平行样1 平行样2 115 110

98 100

注：水样1为2006年8月17日取自环城河枕河人家附近；水样2为8月17日取自青甸湖麦芽厂附近。 对数个水样检测细菌，稀释方法5→45ｍL的菌落总数均大于1→9mL的菌落总数。

二、《规范》的倾注法与涂布法比较,涂布法约是倾注法的1.5～4倍

１.倾注法是将1mL水样加入平板内，再倒入融化的培养基，立即混匀，冷却凝固后倒臵培养。其优点是：(1)通用；(2)较易使菌落均匀分布，计数容易；(3)取样量大，结果重现性好。倾注法缺点是：(1)该法不利于严格好氧菌的繁殖生长，分布在培养基内的部分细胞所形成的菌落较小，甚至无法形成菌落，(2)加上有些活菌受热损伤，使检测到的细菌总数偏低。

2.涂布法是将已熔化的培养基倒入无菌平皿,制成无菌平板,冷却凝固后,将0.1mL或0.2mL的样品悬液滴加在固体培养基表面，再用无菌玻璃涂棒将样品均匀分散至整个培养基表面，待样品被完全吸收后倒臵培养。其优点是：(1)可以检测到热敏性菌体；(2)菌落生长在培养基表层，体积大，形态明显；

(3)更适合严格的好氧菌。

涂布法缺点是：(1)不易使菌落分布均匀，有时菌落过大，导致蔓延生长和互相融合，形成链状、片状涂布法菌落影响计数；(2)等待时间长，涂布棒用酒精火焰灼烧后，需放臵数分钟等其完全冷却才能使用；(3)0.1～0.2mL水样涂布在固体培养基表面后需放臵约10分钟等水样被渗透吸收后才能倒臵，因此涂布法的使用并不广泛，只在特殊情况下使用。

3.检测结果比较：涂布法约是倾注法的1.5~4倍，以2个地表水为例，计数结果如下：