苯酚硫酸法测定粗糖含量

1.原理：苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

2.试剂：1.浓硫酸：分析纯，95.5%

2. 5%苯酚：取苯酚5g，定容至100ml。（每次测定均需现配）

3. 标准葡聚糖：分析纯葡萄糖。

3.绘制葡萄糖标准曲线：

标准曲线溶液的配制。准确称量50mg干燥至恒重的葡萄糖，加适量水溶解，转移至500mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为10ug/mL的葡萄糖溶液。然后按下表依次添加标准葡萄糖液、蒸馏水、5%苯酚溶液、浓硫酸，充分摇匀，沸水浴中30min，冷却后于490nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，求出回归方程。

试管号

试剂

1 2 3 4 5 6 7 标准葡萄糖溶液

0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

ml

蒸馏水ml 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 5%苯酚溶液ml 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 1.6 浓硫酸ml 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 葡萄糖浓度0 10 20 30 40 50 60