为临床上能快速诊断虎流感.通过对已分离获得的虎源H5N1流感病毒和GenBank中报道的A型H5NI亚型流感病毒的NP、HA、NA序列。设计合成各个基因的特异性PCR扩增引物和A型流感病毒通用反转录引物。通过优化反应体系及条件.建立一步法可同时扩增出3个基因的联合RT-PCR检测方法。将该方法用于临床病料检测,并与电镜负染、HA／HI及病毒分离等方法进行比较。结果,NP、HA、NA基因的扩增

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虎源流感病毒 R— C T P R检测方法的建立及其应用研究 贺文琦，玉伟，高夏成柱，杨松涛，立刚刘丹王， (军事医学科学院军事兽医研究所， t吉林长春 10 6; 3 02吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春 106; 3 0 2

黑龙江省东北虎林园，黑龙江哈尔滨 102 ) 507

摘要：临床上能快速诊断虎流感。为通过对已分离获得的虎源 H5流感病毒和 G n n中报道的 N1 eBak

A型 H NI亚型流感病毒的 N HA、 A序列。计合成各个基因的特异性 P R扩增引物和 A型流 5 P、 N设 C感病毒通用反转录引物。通过优化反应体系及条件 .建立一步法可同时扩增出 3个基因的联合

R—C TP R检测方法。将该方法用于临床病料检测，并与电镜负染、A/I H H及病毒分离等方法进行比较。 结果， P、 A、 N H NA基因的扩增片段大小分别为 4 4 p 5 1p 13 p,其检测的敏感性约 10个 6 b、 8 b、7 b 0

T I, CD。。该方法的检出率和病毒分离结果相符，高于电镜负染和 HAHI/试验。结果显示，方法可用该 于虎源流感病毒的临床或实验室检测

关键词：源流感病毒： NlRTP R:测方法虎 H5;—C检 中图分类号： 8 89 Q7文献标识码：￥ 5 ., 8 A Re e r h o s a c fa RT— PCR s y fr M utpe Ge e tci n o g rI fu n a Viu Asa o lil n s Dee t n Tie n e z r s . o l He W e q, oYu e Xi a z u, n o ga W a gL g n i a n i Ga w i, aXin h Ya gS n to, n ia g,Lu D n

( h la eeiayIstt, d m layMe i l cncs C a gh n10 6; eMitr V tr r ntue A a e yo Mit dc iee, h ncu 3 0 2 T iy n i c f i r

aS 。 eV t i r tu l nvrt, h ncu 0 2 T e r ayI i eo Ji U i s y C agh n 106;渤， a gSb r i r ak H ri 102 ) h en s t n t f in ei 3 i iei Tg r, abn 5 0 7 n a eP

Abtat n odrt dans ucl t e nuna i l i s g te te nlez i s(I) s c:I re o igoe qiky i ri ez n cic i h i rif na v r g l f n,u n g u u r TV sq e c n h nle z iu e u n e ifr t n a albe i h n a k d t ae h rmes e u n e a d te if n a A vr ss q e c nomai v i l n t e Ge b n aa b s,te p u o a i r

wr e c df m cnevdrgo f re gn pc cfrTV t e (P adsbye ( AN ) r eesl t o osre eino t gt eesei o I p N ) n u t ee r aa i f y p H,A f o u e n T- C s i R P R.S e i c rme s ee e ie o, HA, N p cf p i i r w r d sg d fr NP A g n w t rme 50 r r d sg e e i P i r . p me ein h i sf r, ot e DNA f g ns o ie 6,5 a d 1 3 b,rs e t ey ee a l e . h rme o b n wa r me t fsz s4 4 8 n 7 p e p ci l,w r mp i d T e p i r t e i a 1 v i f s c mmo s d frif e z vr swee d sg d fru e i h y te i o DNAs o n u e n u n a A i r e ie s n te snh ss fc o l u o .Opi z h e cin t miete ra t o c n i o n sa l h a mut lx RT P R n a sn l tp frs l n o sd tcin o eT V 3 g n s o dt na d e tb i lp e — C i ige s o i t e u ee t ft I e e i s i e mu a o h f g ns T e a s y wee a p id i l

ia ig o i. h sd cso s ma efl wig te rs l fa r me t. h s a r p l n ci c lda n ss T i e iin wa d ol n h e ut o a e n o s c mp rsn w t lcrn mir s o e,h ma guiain/ e g t ain ihbt n n s lt n o h o a o i ee t c c p i h o o e g lt t n o h ma ui t n ii o a d ioai f te n o i o

vr s i is e c l r ralnoc f i.T e rs l ee ta h e s ii fd tcin w sa o t 0 i n t u u t e o l ti l d h e ut w r h tte s n i vt o ee t a b u 1 0 u s u a u s t y o T I￣ a x eln o c r a c ewe n da n ssb h — C n u u ewa e n t td a d te CD n e c l t n od n e b t e ig oi y te RT P R a d c h r s d mo sr e . n e c a h

R P n d tcin o V i moe s n i v n a i h n a o e me t n d meh d . o te meh d T— CR i ee t fTI s r e st e a d rp d t a b v ni e to s S h to o i o

d sr e eei vr rci bea dvla l i l ia dan s r nlb rt ya pi t n ec b dh r s eypa t a l n au be nc ncl igoi o oao p l a o . i c i s i a r ci Ke r s Tie n u n avr s H5, T P y wo d: g ri e z i, N1 R - CR, ee t gmeh d l f u D tci to n

流感病毒分为 A B c三个型，以 A型流感病毒、、的危害最大，自然感染人、马、可猪、海洋哺乳动物以及

禽类等多种动物[根据其表面的两种糖蛋白( 1】。血凝素 ( ) A H和神经氨酸酶( A ) N )变异特征可将 A型流感病毒

基金项目：自然科学基金资助项目( 4 1 9 )全军医学科研基金资助项目(4 0 6;国家 3 7Z 5; 0 0 Z 1)国家科技部科技攻关计划课题 ( 0 B 59 。 2 4A 1 1 0 A

1) 第一作者简介：贺文琦 . 17男.9 7年出生.内蒙占呼和浩特人，博士研究生，从事动物病毒学和病理学研究通信地址：30 2吉林省长春市西安大路 5 3 10 6 33 号吉林大学畜牧兽医学院。T l03 -8 57,— i h 804 o uen。 e{4 1 3 36 Emal wq 5 1@sh . l 7: o

通讯作者：夏成毒，江苏建湖人。 1男，:中国工程院院士，研究方向为分子病毒学。 e 0 3 98 9。 Tl 4 1 479: 6 收稿日期：0 60—6修回日期：060 -1 20 62 . 20 9 1。