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植物RNA的提取

RNA的抽提,附图

TRIZOL法提取植物总RNA

所用器皿均按RNA提取的常规方法处理。具体程序为：

（1）：取材料，加液氮研磨，在1.5 ml离心管中，分别加1ml TRIZol（Tiangen）[或RNAiso（TAKALA）]试剂，在离心管中加5-6勺样品，约1g，用力摇15秒（也可涡旋），室温静置15分钟；

（2）加200ul的氯仿上下颠倒混匀，室温静置2min；

（3）4 ℃，12,000g离心15分钟；

（4）将上清液移入新的1.5ml离心管，分层，下层红色酚层，界面，上层水相（含RNA）；

（5）加入等体积的异丙醇沉淀RNA（一般500-700ul），轻微颠倒，-20℃沉降1h（此过程可延长）

（6）4 ℃，12,000g离心15分钟；

（7）弃上清，加1ml 75%乙醇，轻微颠倒，清洗沉淀，在7,000g，4℃，离心5分钟；

（8）弃上清，风干（不能太干否则RNA很难溶解），加适当体积 RNase-free water 溶解。

1.2.2 总RNA定量与完整性检测

（1）定量：测A260nm、A280nm处的吸光值，计算A260/A280的值，

以估计总RNA纯度。通过A260的值计算总RNA量。

（2）RNA完整性检测：在1.2%普通琼脂糖胶上分离总RNA，若有三条 (代表rRNAs) 条带清晰，无拖尾的带（如图），则说明总RNA完整，可用于后续实验。

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