人脂肪细胞总RNA的抽提

人脂联素

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中国药物与临床 20年 4月第 5 05卷第 4 C iee e ei期 hns m de R s&Ci c,pi20,o 5 o l i A r 05V l, . ns l N 4

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人脂肪细胞总 R A的抽提 N及对脂联素 m N R A的扩增 山西医科大学生物化学教研室(30 1 000 ) 杨泽华解军于保锋杨琦张悦红牛勃

【摘

要】目的建立一种提取脂肪组织总 R A并能够有效地进行反转录一 N聚合酶链反应(TP R的方 R—C )

法。方法利用 T zl i ro试剂提取人皮下脂肪组织总 R A, N用紫外分光光度法鉴定其产率及纯度,用琼脂糖凝胶电 泳和 R - C T P R鉴定所提取的总 R A的完整性。结果采用选择性 m N T P R试剂盒特异性地扩增出脂联 N R AR— C

素(d oet ) p ai ncn和肌动蛋白(-cn的 m N。结论在脂肪组织总 R A抽提中容易混入基因组 D A而采 p i 3 i 1 at ) R A - N N, 用选择性 m N T P R只针对 m N R AR - C R A进行特异的扩增。

【关键词】脂细胞;R A N;聚合酶链反应,逆转录酶;脂联素 Exr c in o t lRNA r m u a d p c t nd s e i c a pi c in o d p n ci RNA t a to ft a 0 fo h m n a io y e a p cf m l a o fa i o e tn m i i f De a me t T iu n 0 0 01 C i a p r n, ay a 3 0, h n yAⅣG 一

h oXE u .U B o— gY N Q,H N Y e— n,| B Sax Mei l n e i i h msy t .l JnY o蠹n,A G iz A G u gNU hni d a‘ c U i r t Bo e ir v sy c t

【 btat A s c】 r

O jci no e t et lhamto oetc ta R A fm hm nai ct ad beteI r r o sbs e dt xat ol N r u a d oy n v d a i h r t o p e

eete e o vr as p s pl e s c a atnR— C ) ̄os U i r O r gn t etc fc vl pr r r e et nc t e o m r e hi r co(T P R. i y fm e s r r a y a n e i i Me d s g i le

eto x at n T Z a r ttlRNA fo h ma u c tn o sftt s eUl a ilts e t p oo t Su e o d tr n xrcin rt d oa rm u n s b u e u a i u . t voe p cr h tmer Wa sd t eemie e ta to ae a a s r o y n

p r y a ao eg l l t p oe i a d R— C d n i eit t o x a td t a R u t, g r s e e r h r s T P R t ie t yt e ) f t c tl NA Re ut U igt e R— i eco s n o f h n , er e o . sl sn h T P CR i c n iig d P a ao a p cfal mpi h kt o t nn NT n lg c n s e i l a ly te mRNA fa io e t n a t . n l so T e a c y f o dp n ci a d B— ci Co cu i n n n h e ta t n o tlRNA fo ftt s e i ot n c n miae y g n me DNA. u hsd fe a e ra i v r o x ci f o r o ta rm a i u S f o t n td b e o s e a b tti ee tc n b e d y o ec me l

b eu eo P R kt o tiig d P a ao . vt s f r C i c n n n NT n g h R - a l

【 yw rs A i ct;R A o m r e hi r co, vr asr t e d o et Ke od】 d oy s N;Pl e s a atn r es t ncpa;A i ncn p e y a c ne i e er i s p i

肥胖在发达国家伴随 2型糖尿病发病的增加已较为普遍E尽管糖尿病在发病过程中所经历的确 -。切机制仍未明了,但是胰岛素抵抗是其发病初期的病理生理改变,其中涉及到遗传因素、肥胖和久坐的生活习惯使其进一步恶化。有资料表明在非糖尿病人群中胰岛素抵抗与肥胖有显著的相关性,并且在糖尿病患者中肥胖使胰岛素抵抗进一步恶化[,蚓而胰岛素抵抗是前述多危险因素聚集现象的一个关键因子.因而深人研究肥胖导致胰岛素抵抗的分子机 制就显得尤为重要。新近研究发现脂肪组织不只是

要意义。因而从脂肪组织中提取高质量

的总 R A并 N

进行有效的反转录一聚合酶链反应( T P R) R— C是其后做进一步研究的基础。由于脂肪细胞体积大,数量少,并含有大量脂质,这就使得从脂肪组织提取高质 量的总 R A并进行有效的 R— C N T P R显得尤为困难。

本研究通过摸索找到了一套有效的提取脂肪组织总 R A并进行 R— C N T P R的方法,功地对 B成肌动蛋白 (—cn和 aioet B at ) d ncn进行了 R— C为其后进 i p i T P R, 一

步研究不同病理生理条件下和药物干预的情况

下 .肪细胞 aioet脂 d ncn表达水平的变化,而为 p i进

简单地作为一个脂肪的储存库,同时也是一个重要

研发新的糖尿病治疗和减肥药物奠定了基础。 1材料与方法 1材料及主要仪器 . 1 A V转录酶 . R A Sl t eP R试剂盒, M反 m N e ci C e v

的内分泌器官。对于内分泌、代谢及感染信号的整合 以维持机体能量的稳定发挥有重要的作用。脂肪细 胞分泌一系列生物活性蛋白人血。这些分泌蛋白总

称为脂肪细胞因子,其中包括瘦素( pi)] 1 t[肿瘤坏 e n6, 死因子(N ), T F—纤溶酶原激活抑制物 (A )1, P I一t脂

D A M re等购自大连宝生物公司。 N akr焦碳酸二乙酯

肪细胞蛋白酶 ( i i E抵抗素( st )o脂联素 a p ng d s )l, r ii E, e sn 3 (d oet )]研究这些细胞因子在不同状态下表 ai nc nI。 p i n

( E C、ro、去离子甲酰氨、a N D P )Ti l z TqD A聚合酶等购自上海生工生物工程技术服务有限公司,常规试剂如琼脂糖等为进口或国产 A R级以上。引物由上

ai et o i T A G C达水平的变化对于阐明肥胖所致胰岛素抵抗具有重海生工合成 .dpncn上游引物为 5G G T G

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