多种细胞的培养方法,步骤,心得,经验(大总结)!

多种细胞的培养方法

HePG2细胞和L-02细胞的传代:

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株,L-02细胞则是人胎肝细胞株,二者所使用的培养基可以是一样的,即最常见的DMEM。一干使用低糖的。

细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热,细胞经PBS清洗两遍后,每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶,胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定,原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后,为使酶的活性最大,将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中,3分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消化,时间相应加长,可以在显微镜下观察,当细胞界限已十分清楚,即已分离为单个细胞,且有少量细胞漂起,则要终止消化了。

16HBE细胞株的传代方法:

镜下观察细胞生长融合达70-80%,准备传代。常规开紫外照射超净台20分钟,同时把含10%胎牛血清的MEM培养基、0。25%胰酶、PBS放置37度培养箱中孵育。20分钟后开始传代。先弃掉旧培养液,加PBS洗一次,然后加0。25%胰酶2ml消化(指25乘25cm大小的培养瓶)细胞,镜下观察细胞,细胞突起回缩,细胞变圆,然后将培养瓶放置37度二氧化碳培养箱中孵育3分钟左右(当然时间是随机的,比如:新配的胰酶作用时间短一些,配制时间长的胰酶作用时间会长一些,当然要不断地镜下观察),待细胞大部分消化下来(大部分细胞呈流沙状脱离瓶壁),加4ml含10%胎牛血清的MEM培养基终止消化。反复吹打瓶壁上残留的细胞,并将已消化下来的细胞吹打均匀,然后吸入离心管中1000转离心1分钟,然后弃掉上清,用手指将离心管中的细胞弹打均匀,加新培养基,吹打均匀,分至3个新的培养瓶中,补足培养液。将培养瓶平放,小心移入37度二氧化碳培养箱中培养过夜。次日观察。

胃癌细胞AGS和SGC-7901的培养:

细胞传代时不能长的太满,70%-80%就可以传了.实验前先把紫外灯打开照30分钟,然后再把鼓风机开10分钟,同时把培养液和胰酶放入37度水浴箱中,千万记住不要盖上水浴箱的盖子.传代时,我一般把培养瓶口过一下火,就直接把培养液到去,再用0.25%的胰酶(不含EDTA)消化.等细胞变圆,细胞间空隙加大就直接把培养液到去,不用离心,然后再吹打,虽说要轻柔,但很难吹打成单细胞悬液,所以稍用力也没有关系.虽然操作不规范,但

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