拟南芥叶细胞游离钙离子的测定

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热带亚热带植物学报 2 0, 21: 9 8 0 4 1() 7— 2

Jun o r ia ad Sbr i lB t y ord f To c l n u tpc o n p o a a

拟南芥叶细胞游离钙离子的测定 孙清鹏 Y 4菁 -, (华南师范大学生命科学学院,广东省植物发育生物工程重点实验室,东广州 5 0 3 )广 1 6 1

摘要:低温(℃)件下将钙离子荧光探针 Fu -/M导入拟南芥叶细胞, 4条 lo3 A利用激光共聚焦显微技术检测了胞内钙离子荧光强度的分布。实验证明,低温导入 Fu -/M法测定拟南芥叶细胞中钙离子荧光强度的变化切实可行。 lo3A茉莉酸 (处理能够诱导胞内游离钙离子浓度的升高。 J A) 关键词:拟南芥: lo3A钙离子: Fu -/ M;茉莉酸 中图分类号: 4 . Q9 27 文献标识码: A文章编号:10 - 3 52 0 ) 10 7 - 0 5 3 9 (0 40 - 0 9 0 4

Th t c i n o t s f r e Ca e De e to f Cy o o c F e i i l f Ar b d pss t a i n a e n Cel o a i o i h l a Le v s s a S N Q n—e g U i gp n Bo c nlg o ie hooyfr t

W N iojn A G X a— g i C Ⅲm K y L b o e a f

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Ab ta t F u r s e t p o e Fu一 sr c: lo ec n rb lo 3

wa o d d i t 1 el f Ar]i o ss h l n e v s u d r l w s l a e n o t e c l o ad p i 1 s a t a i a l a e n e o a

t mp r t r t 4 e e au e a ℃ t a u e t e f o e c n e i t n i f i ta el lr Ca u i g l e c n i g c n o a o me r 1 u r s e c n e s y o r c l a 2 s a r s a n n o f c l s 1 l t n u n s

mi oeh i e、h nte ev s r et t 0 I mo i

i c tsl e a ice e t n c tcnq .Ⅳ e 1 la e e rae wi1 lmo Lj r u 1 we t d 11 0 a/ a nca yooi f e 2n ra dwi i s c cr C+ s h o emi n e c e e katr n T ee p f n h ws 1 t1si ai l to ee t ta el lr n na dra h d a a f mi . h x e me t o 1 1 afs beme1 dt d tc r c l a p e5 i s t a ti S e 1 0 n i u C抖i t c a e f A.t a in . a n i atev s n l o h l a a Ke r s b d p i t a in; l o 3 AM; a 4 J mo i c d y wo d:A r i o s h l a F u一/ a s a C 2 a - s . nca i

C抖是真核生物中调节细胞信号转导的中心环 a节,a C抖参与植物冷激、红光/红光反应、病和远抗伤害反应等一系列刺激反应的调节【”。质外体钙库中 C 2的流入或胞内钙库中 Ca的释放均可引起 a+ 2+胞质中游离钙离子浓度 (C 2i【a+的升高[] ) 2]。细胞内【a+ C 2的测定有多种方法,钙离子荧]用 光探针标记细胞,然后用激光共聚焦显微镜测定【 a+i态变化是近年来应用较广泛的方法之一嘲 C2动]。

荧光强度变化,无光谱偏移,其荧光强度与胞而且内游离 C抖浓度成比例关系。因此, a当细胞中导入 C敏感的荧光探针 Hu一,胞内荧光强度的 a o3后细 变化即代表了【 a]水平的变化。 C 2i+ 但因 Fu - lo3是离子形式,易进入细胞。不

Fu-/M是 Fu - lo3A lo3的酯化形式,易进入细胞,较可 被细胞内的酯酶分解成 Fu一,再与游离钙离子结 lo3

合,生荧光强度的变化[1产 3。用 Fu一/和激光, 4 lo3AM

C荧光探针有多种,其中 Fu一 a lo3用 4 8n l激 8 l氩 T

扫描共聚焦显微镜可以研究植物组织标本中的单 个细胞,而无需从植物组织中分离出单个细胞[从 4]。 Z ag等嘲尚忠林等同用低温 (℃) h n和采 4孵育法分别 将 Fu一/ M成功导入小麦根细胞和

百合花粉细 lo3A

光激发,与钙离子结合后荧光可增强 5 - 0倍, 0 10可 用激光共聚焦显微镜观测 5 1 lmo/的胞内 -0 a l L 钙,有利于观察钙峰,不易发生钙缓冲作用[也 4]。此外,在单波长条件下,lo3与 C结合后仅产生 Fu一 a 收稿日期: 0 3 0 - 9 20—4 2接受日期: 0 3 0 - 6 2 0 - 6 2

胞。我们以拟南芥叶片为材料, Hu一/M导入将 o3A

基金项目:国家自然科学基金(9 70 9资助 3 9 0 7) 通讯作者 C rep n iga to orso dn u r h

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